Correción de fondos con ImageJ y Plugin Calculator_Plus
Todos los microscopios, por buenos que sean presentan pequeñas deficiencias en la iluminación de las muestras, esto se traduce que aún realizando el centraje del condensador correctamente, podemos tener diferencia de iluminación entre el centro de la imagen y los bordes de esta.
fonsIncorrecte
En el ImageJ existen multitud de plugins para corregir estas diferencias de iluminación. Aquí os explicaré como hacerlo con el Plugin Calculator_Plus ( http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/calculator-plus.html ).
Doy por supuesto que ya tenéis instalado el ImageJ ( http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html ) y que habéis copiado el Plugin Calculator_Plus.class en la carpeta Plugins.
Para realizar las correcciónes de fondo aplicaremos la formula citada en la web del Calculator_Plus:
Imagen Corregida = (Imagen/Fondo)*255
El resultado es:
Fondo Corregido
Como podreis observar se ha corregido no sólo el fondo , sino también el balance de blancos. Ahora bién el “precio” que debemos pagar es una reducción del rango dinámico de la cámara. Para que el resultado sea el correcto la imagen del fondo DEBE tener la misma exposición y configuración que la imagen a corregir, esto se consigue simplemente quitando la muestra del microscopio ;-).
Aquí va un vídeo de todo el proceso en el que podréis ver que también funciona con imágenes de fluorescencia: